В России вопросам изыскания, освоения и производства новых ЛС и ЛФ уде-ляется большое внимание, успех создания которых зависит от соблюдения единых организационных принципов и подходов на всех стадиях внедрения научно-техни-ческих разработок. В связи с этим в последние годы возросли требования к проведению отдельных этапов создания новых ЛС, и, прежде всего, к стадии доклинических исследований, одним из важнейших разделов которых являются токсикологические исследования. Программа токсикологических исследований предусматривает проведение экспериментов на различных видах лабораторных животных для оценки общетоксического действия новых ЛС и ЛФ и разработку мероприятий по терапии интоксикаций, связанных с передозировкой или повышенной чувствии-тельностью к препарату. Одним из этапов оценки общетоксического действия новых ЛС и ЛФ является изучение их острой и хронической токсичности [4,6,8].
Целью исследования явилась оценка острой и хронической токсичности МК в экспериментах на животных.
Материалы и методы исследования
Объектами исследования являлись образцы субстанции МК и его ЛФ для наружного применения (собственно мази и гели).
Острая токсичность - вредное действие ЛС, проявляющееся после его однократного применения или повторного введения через короткие интервалы времени в течение суток, для определения переносимых, токсических и летальных доз ЛС и причин наступления гибели животных.
Хроническая токсичность характеризуется степенью повреждающего действия ЛС при его длительном введении, выявление наиболее чувствительных органов и систем организма животных, а также исследование степени обратимости вызываемых им повреждений.
Исследования по оценке острой и хронической токсичности МК и его ЛФ проводили на базе ЦНИЛ КГМУ и на кафедре фармакологии ФГОУ ВПО КГАВМ им. Н.Э.Баумана и с соблюдением правил программы доклинических испытаний по оценке безопасности потенциальных ЛС. Все животные содержались в стандартных условиях вивария при свободном доступе к пище и воде с периодом акклимати-зации не менее 2-х недель и лишались пищи и воды за 12 часов до начала экспе-римента [4,6]. В опытах по оценке острой токсичности использовали 50 белых крыс массой 250-280 г и 50 белых мышей массой 20-26 г обоего пола одинакового возраста, которым однократно внутрижелудочно с помощью зонда (шприца с инъекционной иглой с напаянным оловом на конце) вводили МК. В виду того, что МК не растворим в воде, последний вводили в виде суспензии в 2 %-й крахмальной слизи (смешивали МК со слизью в различных пропорциях: 1:2; 1:10;1:15 и 1:20). Животных делили на 5 групп - 4 опытные и 1 контроль (по 10 в группе). Всем 4-м группам (мышам вводили в дозе 0,5 мл, а крысам в дозе 5 мл на голову) однократно вводили описанным выше способом суспензию c МК в различных пропорциях:
1-й группе животных вводили суспензию МК в пропорции 1:2 (мышам в дозе 12500 мг/кг, крысам - 9100 мг/кг); 2-й группе вводили в пропорции 1:10 (мышам в дозе 2500 мг/кг, крысам -1900 мг/кг); 3-й группе в пропорции 1:15 (мышам в дозе 1500 мг/кг, крысам -1300 мг/кг), 4-й группе в пропорции 1:20 (мышам в дозе
1200 мг/кг, крысам -1000 мг/кг). В контроле животным однократно вводили крахмальную слизь без МК в тех же объемах. В течение 10 дней за опытными животными вели наблюдение. Учитывали массу животных до и после введения МК, состояние волосяного покрова, слизистых оболочек, подвижность, отношение к корму, время возникновения и характер интоксикации, её тяжесть и обратимость, сроки гибели или их выздоровления.
Хроническую токсичность МК определяли на 20 белых крысах разделенных на опытную и контрольную группы (в каждой по 10 крыс). В течение 30 дней 1 раз в сутки опытной группе животных при помощи зонда внутрь вводили МК в виде суспензии (с 2 % крахмальной слизью в пропорции 1:10) по 0,6 мл в дозе 1/10 от ЛД50 (т.е. в дозе 208 мг/кг). Контрольным животным назначали крахмальную слизь без добавления МК в тех же объемах (0,6 мл). За животными вели постоянное наблюдение в течение месяца. В ходе проведения опытов оценивали общее состояние животных, характер приема корма и воды, время возникновения и характер интоксикации.
Статистическую обработку данных проводили с помощью программы Micro-soft Excel. Достоверность устанавливали по методу Стьюдента-Фишера [5,7].
Результаты исследований и их обсуждение
В ходе работы по оценке острой токсичности в опытах на животных обнаружено, что после введения МК в пропор-ции 1:2 через 30 минут у животных наступало угнетённое состояние. Реакция на внешние раздражители (шум, свет, тактильные, болевые) имелись, но были слишком выраженными, животные неохотно принимали корм, дыхание было поверхностным и учащённым. Спустя 2 часа с момента введения МК общее состояние становилось неудовлетворительным, животные находились в лежачем состоянии, передвигались с трудом, что говорило о явном выраженном угнетении. Через 4 часа все животные погибали от угнетения дыхания. При вскрытии погибших животных обнаруживали полнокровие внутренних органов. Почки, печень были без видимых изменений, слизистые желудка и кишечника без кровоизлияний и эрозий, а содержимое кашицеобразной консистенции, местами с уплотнениями, окрашенное в жёлтый цвет (цвет самого МК). При введении суспензии из МК в пропорции 1:10 у животных наблюдалась такая же картина, как и в случае с животными 1-й группы, за исключением времени проявления токсического отравления. Угнетение проявлялось через 1 час после введения МК, а гибель 80% животных (от общего числа животных в данной группе) наступала в течение 15-18 часов на фоне судорог от угнетения дыхания. Вскрытие погибших животных 2-й группы показало полнокровие внутренних органов. Почки, печень были без изменений, слизистые желудка и кишечника без кровоизлияний, эрозий и язв, а содержимое кашицеобразной консистенции, местами уплотнено. В тонком отделе кишечника МК обнаруживался в наибольшем количестве. При введении суспензии МК животным 3-й группы в пропорции 1:15 у экспериментальных животных через 2 часа наступало угнетённое состояние, характеризуемое вялостью, пребыванием в лежачем состоянии, поверхностным и учащённым дыханием, при этом животные охотно принимали корм и воду. Реакция на внешние раздражители (шум, свет, тактильные, болевые) становились неадекватными, более выраженными. Спустя сутки погибали 60-70 % крыс и мышей. Патологическая картина вскрытия погибших животных была аналогичной картине гибели животных во 2-й группе. Спустя первые сутки у выживших животных после введения МК общее состояние постепенно приходило в норму, животные были более подвижными и активными, хорошо принимали корм и воду. Волосяной покров животных был достаточно чистым, но отмечалась его матовость. Слизистые оболочки глаз и рта были розового цвета. На протяжении опыта, в 3-й опытной группе среди оставшихся животных летальных исходов не наблюдалось. При введении 4-й группе животных суспензии с МК в пропорции 1:20 угнетённое состояние у животных наступало через 2 часа, но через 4 часа с момента введения МК общее состояние становилось удовлетворительным, животные были более активны, однако в сравнении с контролем наблюдалось выраженное угнетение. В течение всего времени наблюдения мыши и крысы после первых суток отличались от 3-х первых опытных групп животных активностью и подвижностью, хорошим приемом корма и воды. Волосяной покров животных был достаточно чистым, с матовым оттенком. Слизистые оболочки глаз и рта были в норме. На протяжении опыта, как в контроле, так и в 4-й опытной группе животных летальных исходов не обнаруживалось. Определение параметра острой токсичности МК для мышей и крыс проводили по методу Кербера (1931).
Дозу вещества, вызывающую гибель половины животных (ЛД50) рассчитывали по формуле:
где Д - доза, вызывающая гибель всех животных (ЛД100), ∑ - знак суммирования, z - половина суммы числа животных, погибших от двух последующих доз, d - разница значений доз, стоящих рядом, П - число животных в каждой группе.
Определение параметра острой токсичности МК по Керберу для белых мышей и крыс показало, что полулетальная доза (ЛД50) для мышей равна 2110 мг/кг, а для крыс - 2085 мг/кг.
Результаты изучения хронической токсичности МК показали, что использование крысами МК в дозе 208 мг/кг (0,6 мл суспензии в пропорции 1:10) 1 раз в сутки в течение 30 дней не вызывало каких-либо нарушений со стороны общего состояния животных. Крысы охотно принимали корм и воду, признаки интоксикации отсутствовали. Волосяной покров был чистым и блестящим, видимые слизистые оболочки были розовыми без признаков воспаления и раздражения и не имели явных отличий в сравнении с контролем. В конце эксперимента по 3 крысы из каждой группы забивались для исследования патологических изменений в органах и тканях. Видимых изменений по отношению к контролю во всех внутренних органах и тканях животных не обнаруживалось. Тем самым, результаты исследований на хроническую токсичность МК показали, что многократное введение суспензии МК в указанной выше дозе не вызывает гибели животных опытной группы и существенных отклонений от нормального состояния.
Вывод: опытные животные обоего пола одинаково чувствительны к токсическому действию МК. По параметрам острой и хронической токсичности на животных согласно ГОСТу 12.1.007-76 МК может быть отнесён к классу малотоксичных веществ [2].
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Годзенко А.А. Перспективы применения мелоксикама в лечении суставных синдромов / Русский медицинский журнал, 2006.- Т. 14.- № 25.- С. 1846-1848.
- ГОСТ 12.1.007.-76 «Межгосударственный стандарт. Система стандартной безо-пасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».- Москва, 1999.- ИПК издательство «Стандарт».
- Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. - 11-е изд., доп. - М.: «Медицина», 1990. - 400 с.- С. 145.
- Елизарова О.Н., Жидкова Л.В., Кочеткова Т.А. Пособие по токсикологии для лаборантов. Москва: издательство «Медицина», 1974. - 168 с.
- Лактин Г.Ф. Биометрия. [Учеб. Пособ. для биол. спец. ВУЗов] - 4-е изд., перер. и доп. - Москва: Издательство «Высш. шк.», 1990. - 351 с.
- Методические рекомендации по изучению общетоксического действия фармако-логических средств - Москва, 1997.
- Тукшаитов Р.Х. Основы динамической метрологии и анализа результатов стати-стической обработки (биология, медицина, химия, физика). - Казань, 2001 - С. 282.
- Фисенко В.П. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изуче-нию новых фармакологических веществ. - М., 2000. - 238 с.
Библиографическая ссылка
Мустафин Р.А., Насыбуллина Н.М., Газеев И.А., Поцелуева Л.А. К ВОПРОСУ ДОКЛИНИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ МЕЛОКСИКАМА И ЕГО ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ В ЭКСПЕРИМЕНТАХ НА ЖИВОТНЫХ // Современные наукоемкие технологии. – 2010. – № 2. – С. 16-19;URL: https://top-technologies.ru/ru/article/view?id=24425 (дата обращения: 24.04.2024).